ساختمان اپیسیالین

لینک دانلود و خرید پایین توضیحات

فرمت فایل word  و قابل ویرایش و پرینت

تعداد صفحات: 11

بسمه تعالی

اپی سیالین /CA15-3 ساختمان و اهمیت آن بر پیشرفت سرطان سینه

(اپی سیالین /آنتی ژن کار سینوما 15-3)

بخش بزرگی از آنتی بادیها ی منو کلونال بر علیه موسین های روی سلولهای کار سینوما می باشند .تعدادی از این آنتی بادیها ی منو کلونال بطور مستقیم بر علیه یک سیالوموسین اپی تیلیال که اپی سیالین نامیده می شوند می باشند .

اپی سیالین یکی از گلیکو پروتئین های بزرگ بر روی سطح اکثر سلولهای کار سینوما می باشد ، به استثناءچند مورد ،این مولکول فقط در بافتهای نرمال در سطح بالائی سلولهای غدد برون ریز وجود دارد بنابر این با گردش خون بدن تماس مستقیم ندارد .

بر خلاف آن ،در سلولهای کاروسینوما این مولکول آمیب شکل غیر قطبی است اپی سیالین یک گلیکو پروتئین متصل به غشاء است اما دومن برون سلولی آن می تواند از سلول رها شود ودر سرم بیماران با سرطان پستان ظاهر شود.

آنتی بادی منو کلونال بر علیه یک قسمت غیر گلیکوزیله و غیر تکراری مولکول می باشد .که این قسمت از مولکول به میزان زیاد در سلولهای سرطانی نسبت به سلولهای اپی تلیال نرمال هم طراز یافت می شود.

برای مثال: میزان مولکول در سلولهای سرطانی پستان حداقل 10 برابر میزان آن در اپی تیلیوم نرمال پستان می باشد .

ماهیت زیست شناختی برای تنظیم بالای بیان اپی سیالین هنوز ناشناخته است .

چندین آنتی بادی منو کلونال بر اپی سیالین جهت توسعه آزمایشهای سرمی استفاده شده است .یکی از این آزمایشها ، قسمت CA15-3 است که یک آزمایش بر اساس تکنیک با استفاده از آنتی بادیهای منو کلونال DF3 ,115D8 می باشد که این آنتی بادیها بطور جداگانه ساخته شده و سپس جهت آزمایشهای CA15-3 ترکیب شده اند.

در این گزارش مختصری در مورد ساختمان مولکولی گلیکو فرمها ی مختلف اپی سیالین در آزمایش سرمهای گوناگون و تاثیر این مولکولها در از در چسبندگی سلولی و متاستاز توضیح داده شده است.

ساختمان اپیسیالین

در اثر کلون کردن DNAاپی سیالین و تعیین توالی آن ،نشان داده اند که اپی سیالین به صورت یک مولکول درون غشایی ساخته شده است که قسمت اعظم آن به صورت دومن خارج سلولی و یک قسمت دیگر که متشکل از 69آمینو اسید به صورت یک دومن سیتوپلاسمیک وجود دارد .

دومن خارج سلولی تقریباً دارای مناطق تکراری متشکل از 20 آمینو اسید می با شد.

قسمتهای تکراری در جمعیتهای مختلف ،متفاوت می باشد که در نتیجه اختلاف در وزن مولکولی آن در افراد مختلف میباشد .

قسمتهای تکراری خارج سلولی همراه با قسمتهایی که به سطح سلول چسبیده اند حاوی تعداد زیادی سرین و تراونین هستند که به طور بالقوه دارای مناطق چسبندگی برای اتصال های گیلکان می باشند و حاوی دومن های شبه موسین هستند که بیش از نیمی از پلی پپتیدهای ساختمان را شامل می شوند که این حالت حتی در کوچکترین اللها نیز مشاهده شده است .

توالیهای تکراری در هر الل مختلف بوده و تقریبًا بین  میباشند . دومن موسین اپی سیالین شامل تعداد زیادی پرولین و دیگر آمینو اسیدها ی هلیکس می باشند که در نتیجه باعث تشکیل یک ساختمان گسترده با تعدادی مار پیچ B- می شود.

این ساختمان گسترده بطور خیلی محکم می باشد در نتیجه باعث چسبیدن تعداد زیادی گلیکانهای با اتصال صفر به مولکول می شوند که نهایتاً دومن موسینی اپی سیالین طول زیادی پیدا می کند .بر طبق محاسبات انجام شده هر 20 آمینو اسید گلیکو لیزه در یک پلی پپتید ،طول تقریبی معادل5 نانومتر دارد .

بر همین اساس طول دومن شبه موسین اپی سیالین بین 200-500نانو متر بر روی غشا سلولی می باشد.

طبق بررسیهایی که بر روی میکروسکوپ الکترونی انجام گرفته مولکولهای خالص شده اپی سیالین و همچنین مولکولهای اپی سیالین بر روی رده ای سلولی INVITROدارای ساختمان نخی شکل می باشد.

توضیح شکل 1:مدل هایی از موسین متصل به سلول (اپی سیالین)و موسین مترشحه در مدل اپی سیالین ،پروتئین اسکلت بندی شامل یک منطقه حاوی 40 واحد تکراری (800 آمینو اسید)

می باشدکه این میزان برابر با تخمین واحدهای تکراری الل های کوتاه اپی سیالین در رده سلولی کار سینومای پستان می باشد ،دومن خارج سلولی مولکول تقریباًبه طور کامل توسط اتصالات قندی پوشیده شده اند.

5 اتصال قندی در قسمت C – ترمینال منطقه تکراری وجود دارد .در ناحیه C- ترمینال یک قسمت متشکل از 24 آمینو اسید در منطقه درون غشایی وجود دارد ،که متعاقب این قسمت دومن درون سیتو پلاسمی متشکل از 69 آمینو اسید وجود دارد .

در قسمت دیگر ساختمان ماکرو مولکولی نشان داده شده است که اکثر پروتیین های اسکت ساختمانی توسط اتصالات کربو هیدراتی پوشیده شده اند،تنها در قسمتهای آخریC وN ترمینال حاوی دومن های غنی از سیستیئن بدون گلیکولیزاسیون می باشد که این دومن ها مسئول تشکیل مولتی مریزاسیون مولکولهای موسین می باشند.

اپی سیالین با موسین اصلی که توسط سلولهای خاص ترشح شده و باعث تشکیل لایه موکوسی بعنوان مثال:در دستگاه گوارش می شود .فرق می کند موسین اصلی توسط سلولهای ویژه نظیر سلولهای گوبلت روده (GobieT CEIIs ) یا غدد بزاقی مولد موکوس تولید و باعث تشکیل یک پوشش ژلی در یک منطقه وسیع می شود.قبل از ترشح ،ژنها بصورت درون سلولی در کیسه هایی ذخیره شده، که در آنجا توسط پیوندهای S-S ایجاد الیگومرهای بزرگ را می کنند .پس از ترشح ،پلیمرهای بزرگ از سطح سلول جدا می شوند برعکس ،موسین های متصل به سطح سلول نظیر اپی سیالین ،CD43 و اپی گلیکانین بر سطح سلول بصورت چسبیده باقی مانده و توسط سلولهای خیلی تخصصی تولید نمی شوند.

آنها ترشح نمی شوند بلکه بصورت ریزش از سطح سلول جدا می شوند.این نوع موسین ها باعث تشکیل ژل نمی شوند .هر دو تایپ موسین در شکل(1 ) نشان داده شده اند.ویژگی هر دو تایپ مولکولی این است که قسمت اعظم پروتیین ساختمان ژن ها از تراونین ،سرین و پروتیین تشکیل شده که بطور خیلی شدید گلیکوزیله شده اند.این ناحیه در موسین های ترشحی منتهی به یک توالی غنی از سیستئن که شامل دومن حقیقی موسین است می شود اپی سیالین یکی از بهترین نمونه موسین وابسته به سطح سلول می باشد.

بیوسنتز اپی سیالین :

توسط نشان دار کردن مولکولهای سنتز شده و سپس ایمنو پری سیپتاسیون نشان داده اند که اپیسیالین به صورت پلی پپتیدبزرگ منفرد ،در اکثر رده های سلولی اندازه تقریبی 200 کیلو دالتون یا بیشتر ساخته می شود.این مولکول پیش ساز ،بطور سریع توسط عمل پروتئولیز به تکه ای کوچکتر که حاوی قسمت درون غشائی و دومن سیتو پلاسمیک و یک قسمت بزرگتر که حاوی اکثر دومن های برون سلولی است ،شکسته می شود.

پس هر روی تکه ها به صورت نابرابر به هم پیوسته باقی می مانند ،این مرحله پروتئو0لیتیک در درون رتیکولواندوپلاسمیک اتفاق می افتد و برای تکامل بر روی مولکول ضروری به نظر می رسد

.اپی سیالین ،اساساً به وسیله افزودن تعداد زیادی اتصلات گلیکان تکمیل می شودکه این اتصالات به طور آشکار باعث افزایش وزن مولکولی آن در ژل پلی اکریل آمید به بیش از 400 کیلو دالتون می شود .این گلیکو لیز اسیون گسترده باعث محفاظت مولکول در مقابل تجزیه پروتئولتیک می شود.در حالیکه پیش سازهای بدون قندبطور سریع دچار تجزیه می شوند.بنابراین مولکولهای بالغ در مقابل عمل پروتستازها شدیداً مقاومت میکنند.

گلیکو لیزاسیون یکی از شاخصهای سختی مولکول می باشد که در بالا درباره آن بحث شده است آخرین مرحله تکامل اپی سیالین ،افزودن اسید سیالیک به گلیکانها می باشد .که باعث افزایش حرکت مولکول بر روی SDS ژل می شود .اولین مرحله شکاف پروتئولتیک بطور مستقیم مسئول رها سازی اپی سیالین از سطح سلول نمی باشد ،نشان داده ا ند که اپی سیالین در اثر دومین جزیه پروتئلتیک به آرامی و احتمالاً بصورت اتفاقی پیش می آید که این عمل به موسین اجازه اتصال به سطح سلول را با نیمه عمری معادل 16-24 ساعت می دهد

گلیکو لیزاسیون افتراقی اپیسیالین:

قسمت تکراری پروتئین اسکلت اپی سیالین خیلی ایمنو ژنیک می باشد.

اکثراً آنتی بادیهای منو کلونال برعلیه این قسمت از مولکول می باشند.همچنانکه توسط واکنش آنتی بادیهای منو کلونال با پپتیدهای سنتتیک ویا با ژنهای بیان شده توسط حاملهای باکتریایی نشان داده شده است .

برای مثال:

آنتی بادی منوکلونال DF3 بطور قوی با پروتئین اسکلتی واکنش می دهد.بهر حال بعضی از این آنتی بادیها ی منوکلونال نظیر 115d8با اپی توپهایی که با پروتئین اسکلتی درگیر هستند واکنش ایجاد می کنند و اما واکنش کامل آن بر اساس حضور کربو هیدراتها بویژه اسید سیالیک اتفاق می افتد. بقیه آنتی بادی های منو کلو نال نظیر 3E12, calبه طور مستقیم بر علیه اپی توپهایی که کربو ئیدراتی هستند عمل می کنند به هر حال وجود باقیمانده ای امینو اسیدی را در کنار اپی توپهای کربو هیدراته به طور کامل در ارتباط با واکنش نمی شود رد کرد .

توالی پپتیدی تعدادی از این اپی توپها نیز مشخص شده است . چند تای آنها بر روی هم انطباق پیدا کرده یا اینکه به تنهایی 1یا 2 امینو اسید درآنها دخیل می باشد .

مقداری از این اپی توپها از جمله سرین با تراونین بطور بالقوه حاوی مناطق گلیکو لیزاسیون

ساختمان اپیسیالین

لینک دانلود و خرید پایین توضیحات

فرمت فایل word  و قابل ویرایش و پرینت

تعداد صفحات: 11

بسمه تعالی

اپی سیالین /CA15-3 ساختمان و اهمیت آن بر پیشرفت سرطان سینه

(اپی سیالین /آنتی ژن کار سینوما 15-3)

بخش بزرگی از آنتی بادیها ی منو کلونال بر علیه موسین های روی سلولهای کار سینوما می باشند .تعدادی از این آنتی بادیها ی منو کلونال بطور مستقیم بر علیه یک سیالوموسین اپی تیلیال که اپی سیالین نامیده می شوند می باشند .

اپی سیالین یکی از گلیکو پروتئین های بزرگ بر روی سطح اکثر سلولهای کار سینوما می باشد ، به استثناءچند مورد ،این مولکول فقط در بافتهای نرمال در سطح بالائی سلولهای غدد برون ریز وجود دارد بنابر این با گردش خون بدن تماس مستقیم ندارد .

بر خلاف آن ،در سلولهای کاروسینوما این مولکول آمیب شکل غیر قطبی است اپی سیالین یک گلیکو پروتئین متصل به غشاء است اما دومن برون سلولی آن می تواند از سلول رها شود ودر سرم بیماران با سرطان پستان ظاهر شود.

آنتی بادی منو کلونال بر علیه یک قسمت غیر گلیکوزیله و غیر تکراری مولکول می باشد .که این قسمت از مولکول به میزان زیاد در سلولهای سرطانی نسبت به سلولهای اپی تلیال نرمال هم طراز یافت می شود.

برای مثال: میزان مولکول در سلولهای سرطانی پستان حداقل 10 برابر میزان آن در اپی تیلیوم نرمال پستان می باشد .

ماهیت زیست شناختی برای تنظیم بالای بیان اپی سیالین هنوز ناشناخته است .

چندین آنتی بادی منو کلونال بر اپی سیالین جهت توسعه آزمایشهای سرمی استفاده شده است .یکی از این آزمایشها ، قسمت CA15-3 است که یک آزمایش بر اساس تکنیک با استفاده از آنتی بادیهای منو کلونال DF3 ,115D8 می باشد که این آنتی بادیها بطور جداگانه ساخته شده و سپس جهت آزمایشهای CA15-3 ترکیب شده اند.

در این گزارش مختصری در مورد ساختمان مولکولی گلیکو فرمها ی مختلف اپی سیالین در آزمایش سرمهای گوناگون و تاثیر این مولکولها در از در چسبندگی سلولی و متاستاز توضیح داده شده است.

ساختمان اپیسیالین

در اثر کلون کردن DNAاپی سیالین و تعیین توالی آن ،نشان داده اند که اپی سیالین به صورت یک مولکول درون غشایی ساخته شده است که قسمت اعظم آن به صورت دومن خارج سلولی و یک قسمت دیگر که متشکل از 69آمینو اسید به صورت یک دومن سیتوپلاسمیک وجود دارد .

دومن خارج سلولی تقریباً دارای مناطق تکراری متشکل از 20 آمینو اسید می با شد.

قسمتهای تکراری در جمعیتهای مختلف ،متفاوت می باشد که در نتیجه اختلاف در وزن مولکولی آن در افراد مختلف میباشد .

قسمتهای تکراری خارج سلولی همراه با قسمتهایی که به سطح سلول چسبیده اند حاوی تعداد زیادی سرین و تراونین هستند که به طور بالقوه دارای مناطق چسبندگی برای اتصال های گیلکان می باشند و حاوی دومن های شبه موسین هستند که بیش از نیمی از پلی پپتیدهای ساختمان را شامل می شوند که این حالت حتی در کوچکترین اللها نیز مشاهده شده است .

توالیهای تکراری در هر الل مختلف بوده و تقریبًا بین  میباشند . دومن موسین اپی سیالین شامل تعداد زیادی پرولین و دیگر آمینو اسیدها ی هلیکس می باشند که در نتیجه باعث تشکیل یک ساختمان گسترده با تعدادی مار پیچ B- می شود.

این ساختمان گسترده بطور خیلی محکم می باشد در نتیجه باعث چسبیدن تعداد زیادی گلیکانهای با اتصال صفر به مولکول می شوند که نهایتاً دومن موسینی اپی سیالین طول زیادی پیدا می کند .بر طبق محاسبات انجام شده هر 20 آمینو اسید گلیکو لیزه در یک پلی پپتید ،طول تقریبی معادل5 نانومتر دارد .

بر همین اساس طول دومن شبه موسین اپی سیالین بین 200-500نانو متر بر روی غشا سلولی می باشد.

طبق بررسیهایی که بر روی میکروسکوپ الکترونی انجام گرفته مولکولهای خالص شده اپی سیالین و همچنین مولکولهای اپی سیالین بر روی رده ای سلولی INVITROدارای ساختمان نخی شکل می باشد.

توضیح شکل 1:مدل هایی از موسین متصل به سلول (اپی سیالین)و موسین مترشحه در مدل اپی سیالین ،پروتئین اسکلت بندی شامل یک منطقه حاوی 40 واحد تکراری (800 آمینو اسید)

می باشدکه این میزان برابر با تخمین واحدهای تکراری الل های کوتاه اپی سیالین در رده سلولی کار سینومای پستان می باشد ،دومن خارج سلولی مولکول تقریباًبه طور کامل توسط اتصالات قندی پوشیده شده اند.

5 اتصال قندی در قسمت C – ترمینال منطقه تکراری وجود دارد .در ناحیه C- ترمینال یک قسمت متشکل از 24 آمینو اسید در منطقه درون غشایی وجود دارد ،که متعاقب این قسمت دومن درون سیتو پلاسمی متشکل از 69 آمینو اسید وجود دارد .

در قسمت دیگر ساختمان ماکرو مولکولی نشان داده شده است که اکثر پروتیین های اسکت ساختمانی توسط اتصالات کربو هیدراتی پوشیده شده اند،تنها در قسمتهای آخریC وN ترمینال حاوی دومن های غنی از سیستیئن بدون گلیکولیزاسیون می باشد که این دومن ها مسئول تشکیل مولتی مریزاسیون مولکولهای موسین می باشند.

اپی سیالین با موسین اصلی که توسط سلولهای خاص ترشح شده و باعث تشکیل لایه موکوسی بعنوان مثال:در دستگاه گوارش می شود .فرق می کند موسین اصلی توسط سلولهای ویژه نظیر سلولهای گوبلت روده (GobieT CEIIs ) یا غدد بزاقی مولد موکوس تولید و باعث تشکیل یک پوشش ژلی در یک منطقه وسیع می شود.قبل از ترشح ،ژنها بصورت درون سلولی در کیسه هایی ذخیره شده، که در آنجا توسط پیوندهای S-S ایجاد الیگومرهای بزرگ را می کنند .پس از ترشح ،پلیمرهای بزرگ از سطح سلول جدا می شوند برعکس ،موسین های متصل به سطح سلول نظیر اپی سیالین ،CD43 و اپی گلیکانین بر سطح سلول بصورت چسبیده باقی مانده و توسط سلولهای خیلی تخصصی تولید نمی شوند.

آنها ترشح نمی شوند بلکه بصورت ریزش از سطح سلول جدا می شوند.این نوع موسین ها باعث تشکیل ژل نمی شوند .هر دو تایپ موسین در شکل(1 ) نشان داده شده اند.ویژگی هر دو تایپ مولکولی این است که قسمت اعظم پروتیین ساختمان ژن ها از تراونین ،سرین و پروتیین تشکیل شده که بطور خیلی شدید گلیکوزیله شده اند.این ناحیه در موسین های ترشحی منتهی به یک توالی غنی از سیستئن که شامل دومن حقیقی موسین است می شود اپی سیالین یکی از بهترین نمونه موسین وابسته به سطح سلول می باشد.

بیوسنتز اپی سیالین :

توسط نشان دار کردن مولکولهای سنتز شده و سپس ایمنو پری سیپتاسیون نشان داده اند که اپیسیالین به صورت پلی پپتیدبزرگ منفرد ،در اکثر رده های سلولی اندازه تقریبی 200 کیلو دالتون یا بیشتر ساخته می شود.این مولکول پیش ساز ،بطور سریع توسط عمل پروتئولیز به تکه ای کوچکتر که حاوی قسمت درون غشائی و دومن سیتو پلاسمیک و یک قسمت بزرگتر که حاوی اکثر دومن های برون سلولی است ،شکسته می شود.

پس هر روی تکه ها به صورت نابرابر به هم پیوسته باقی می مانند ،این مرحله پروتئو0لیتیک در درون رتیکولواندوپلاسمیک اتفاق می افتد و برای تکامل بر روی مولکول ضروری به نظر می رسد

.اپی سیالین ،اساساً به وسیله افزودن تعداد زیادی اتصلات گلیکان تکمیل می شودکه این اتصالات به طور آشکار باعث افزایش وزن مولکولی آن در ژل پلی اکریل آمید به بیش از 400 کیلو دالتون می شود .این گلیکو لیز اسیون گسترده باعث محفاظت مولکول در مقابل تجزیه پروتئولتیک می شود.در حالیکه پیش سازهای بدون قندبطور سریع دچار تجزیه می شوند.بنابراین مولکولهای بالغ در مقابل عمل پروتستازها شدیداً مقاومت میکنند.

گلیکو لیزاسیون یکی از شاخصهای سختی مولکول می باشد که در بالا درباره آن بحث شده است آخرین مرحله تکامل اپی سیالین ،افزودن اسید سیالیک به گلیکانها می باشد .که باعث افزایش حرکت مولکول بر روی SDS ژل می شود .اولین مرحله شکاف پروتئولتیک بطور مستقیم مسئول رها سازی اپی سیالین از سطح سلول نمی باشد ،نشان داده ا ند که اپی سیالین در اثر دومین جزیه پروتئلتیک به آرامی و احتمالاً بصورت اتفاقی پیش می آید که این عمل به موسین اجازه اتصال به سطح سلول را با نیمه عمری معادل 16-24 ساعت می دهد

گلیکو لیزاسیون افتراقی اپیسیالین:

قسمت تکراری پروتئین اسکلت اپی سیالین خیلی ایمنو ژنیک می باشد.

اکثراً آنتی بادیهای منو کلونال برعلیه این قسمت از مولکول می باشند.همچنانکه توسط واکنش آنتی بادیهای منو کلونال با پپتیدهای سنتتیک ویا با ژنهای بیان شده توسط حاملهای باکتریایی نشان داده شده است .

برای مثال:

آنتی بادی منوکلونال DF3 بطور قوی با پروتئین اسکلتی واکنش می دهد.بهر حال بعضی از این آنتی بادیها ی منوکلونال نظیر 115d8با اپی توپهایی که با پروتئین اسکلتی درگیر هستند واکنش ایجاد می کنند و اما واکنش کامل آن بر اساس حضور کربو هیدراتها بویژه اسید سیالیک اتفاق می افتد. بقیه آنتی بادی های منو کلو نال نظیر 3E12, calبه طور مستقیم بر علیه اپی توپهایی که کربو ئیدراتی هستند عمل می کنند به هر حال وجود باقیمانده ای امینو اسیدی را در کنار اپی توپهای کربو هیدراته به طور کامل در ارتباط با واکنش نمی شود رد کرد .

توالی پپتیدی تعدادی از این اپی توپها نیز مشخص شده است . چند تای آنها بر روی هم انطباق پیدا کرده یا اینکه به تنهایی 1یا 2 امینو اسید درآنها دخیل می باشد .

مقداری از این اپی توپها از جمله سرین با تراونین بطور بالقوه حاوی مناطق گلیکو لیزاسیون